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Anticuerpos policlonales contra la proteína recombinante NS3 del virus del dengue


Información de la publicación

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Tipo de publicación

Científica

Tipología

Metodológicas

Medio de publicación

Impreso: Artículos de investigación científica o tecnológica T1

Resumen

Introducción. El dengue es una enfermedad causada por uno de los cuatro serotipos del virus del dengue (DENV) y es endémica en, aproximadamente, 130 países. Su incidencia ha aumentado notablemente en las últimas décadas, así como la frecuencia y la magnitud de los brotes. A pesar de los esfuerzos, no existen tratamientos profilácticos ni terapéuticos contra la enfermedad y, en ese contexto, el estudio de los procesos que gobiernan el ciclo de infección del DENV es esencial para desarrollar vacunas o terapias antivirales. Una de las moléculas del DENV más prometedoras es la proteína no estructural 3 (NS3), la cual es indispensable para la replicación viral y es uno de los principales blancos inmunológicos durante la infección. 


Objetivo. Producir anticuerpos policlonales para contribuir a los futuros estudios sobre las interacciones

entre la proteína NS3 y otras proteínas celulares.

Materiales y métodos. Se expresaron dos proteínas recombinantes del dominio helicasa de NS3 del DENV de serotipo 2, las cuales se emplearon para inmunizar ratas y producir anticuerpos policlonales.




Resultados. Los anticuerpos producidos fueron útiles en ensayos de Western blot e inmunofluorescencia y se reportó por primera vez un anticuerpo policlonal anti-NS3 que permitió la inmunoprecipitación de la proteína viral y la detecta con Western blot sin necesidad de inducir sobreexpresión de NS3 o de

usar extractos de células marcados metabólicamente con radioisótopos.

Conclusión. Las proteínas recombinantes expresadas y los anticuerpos producidos constituyen herramientas valiosas para estudiar procesos infecciosos del DENV que involucren a la proteína NS3 y evaluar pruebas dirigidas a interferir las funciones de esta proteína.

Autores

Liliana Morales, Myriam L. Velandia, María Angélica Calderón,
Jaime E. Castellanos, Jacqueline Chaparro-Olaya

Registro ISSN

0120-4157

DOI Artículo Digital Anticuerpos policlonales contra la proteí...del dengue
Fecha de publicación 24 de enero de 2017
Fecha de aceptación 31 de mayo de 2016
English information
Title

Polyclonal antibodies against recombinant dengue virus NS3 protein

Abstract

Introduction: Dengue is a disease caused by one of four serotypes of the dengue virus (DENV) and
is endemic in approximately 130 countries. The incidence of dengue has increased dramatically in
recent decades, as well as the frequency and magnitude of outbreaks. Despite all efforts, there are
no prophylactic or therapeutic treatments for the disease. Accordingly, research on the processes
governing the DENV infection cycle is essential to develop vaccines or antiviral therapies. One of the
most attractive DENV molecules to investigate is nonstructural protein 3 (NS3), which is essential for
viral replication and a major immune target for infection.
Objective: To produce antibodies to support future studies on NS3 and its cellular interactions with
other proteins.
Materials and methods: Two recombinant proteins of the helicase domain of DENV NS3 serotype 2
were expressed, and used to immunize mice and produce polyclonal antibodies.
Results: The antibodies produced were useful in Western blot and immunofluorescence tests. We
report an NS3 antibody that immunoprecipitates the viral protein and detects it in Western blot with no
need to over-express it or use cell extracts with metabolic radiolabeling.
Conclusion: The recombinant proteins expressed and the antibodies produced constitute valuable
tools for studying DENV infectious processes involving NS3 and for evaluating tests designed to
interfere with its functions

Keywords

Dengue virus; recombinant protein; immunofluorescence; immunoprecipitation; antibody production; blotting, Western

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